作为信息传递中间体的信使RNA(mRNA)在过去的几年间被广泛运用。理论上,mRNA可以在患者细胞内按需生产任何蛋白质,从而实现对疾病的治疗。然而,线性mRNA因其自身易降解的缺陷使得它的应用面临诸多挑战。
越来越多的研究发现通过反向剪接形成一个共价闭合环状结构的circRNA,保护了circRNA不受核酸外切酶的降解,相比于mRNA更加稳定。此外,circRNA具有mRNA不可替代的免疫原性低、表达持久等优势,让更多研究者的目光聚集于此。
酶连方法制备circRNA
内含子自剪切制备circRNA
无论采用哪种制备工艺,线性RNA总是circRNA的前体,消除线性RNA的干扰,是获得高纯度circRNA的关键。circRNA耐受RNase R消化,优质的RNase R可以完全消化线性RNA而不伤害circRNA,达到富集circRNA的目的。
宝锐生物开发出一款纯度高、活性高、特异性强的RNase R产品,为新一代RNA疫苗药物提供助力。
宝锐生物高效RNase R(Ribonuclease R)是一种来源于大肠杆菌RNR超家族且依赖Mg²⁺的核糖核酸外切酶,从3'→5'方向将线性RNA完全水解成二核苷酸和三核苷酸。对环状RNA及双链RNA不敏感,可用于特殊结构RNA的生产,如环状RNA(circRNA)、套索结构RNA(lariat RNA)、3'突出末端少于7个核苷酸的双链RNA以及具有复杂结构的tRNA等。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究,可消化线性RNA使circ RNA或lariat RNA得到富集。
1
去除circ RNA中的线性RNA,应用于circ RNA的鉴定、富集和纯化
2
可变剪切研究
3
识别内含子套索结构RNA
4
基因表达研究
01 蛋白纯度(SDS-PAGE)≥99%
02 宝锐生物高效RNase R特异性消化线性RNA
宝锐生物高效RNase R投入含有线性RNA的反应体系中进行反应,结果显示当RNase R酶切反应时间只有10min时,线性RNA条带已消失,表明RNase R可快速高效消化线性RNA。
03 宝锐生物高效RNase R竞品分析
用等量的宝锐生物高效RNase R和J1/J2两家国内外竞品,对1μg成环前后的产物进行酶切测试。结果显示,相比于竞品,宝锐生物高效RNase R特异性更强,对线性的RNA更专一,而对circRNA几乎无影响,而竞品公司circRNA的量经过酶切后已经发生改变。其次,同样的酶量,宝锐生物高效RNase R能够充分酶切线性RNA,竞品仍有残留。
04 宝锐生物高效RNase R多次冻融不影响酶切效率和特异性
宝锐生物高效RNase R反复冻融多达20次,对酶切效率和特异性没有影响。