文章来源：检验星空。
荧光PCR方法检测病原体已成为常规检测技术，在工作过程中我们也遇到了各种各样、千奇百怪的问题，下面就我们实验室遇到的一些关于PCR扩增曲线的异常情况及一些经验体会跟大家分享。
2、常见异常结果分析
2.1 案例1
2.1.1现象：常见单基因翘尾且出现较大的Ct值和单基因翘尾无Ct值现象，见下图：
2.3.2常见原因：样本中可能存在干扰物质、提取纯化不完全、PCR仪热盖出现异常等。
2.3.3解决方案：复测；重新提取，或使用不同试剂盒提取。
2.4案例4
2.4.1现象：不规则的扩增曲线（见下图）：
2.4.2常见原因：整板其他孔位曲线没有异常情况出现，可能该孔位溶液有气泡影响，气泡可以让光路发生折射，在气泡破掉的时候会导致荧光信号发生急剧的变化，干扰仪器对荧光信号的采集。
2.4.3解决方案： ①加样时减少气泡产生 ；②上机前注意弹掉气泡再离心。
2.5案例5
2.5.1现象：内源性内参曲线异常。
2.5.2常见原因：该孔有异物；温度或荧光信号采集异常；该检测的反应体系中存在抑制物；提取核酸失败；样本采集不合格；样本/核酸漏加。
2.5.3解决方案：打开PCR仪盖，查看孔内是否有异物，假如有异物，用镊子夹出异物，或用洗耳球吹出异物；分析前一批结果中，该孔内标是否扩增，假如连续两次内标无扩增，考虑该孔温度异常或荧光信号采集异常，需要进行校准或报修。排除以上情况后，对原标本复检，若内标正常可以正常发报告；若内标仍然无扩增，则需重新采样复检。
2.6案例6
2.6.1现象：外源性内标曲线异常
外源性加入的内标均一性较好（如G行12孔均有内标曲线，且其CT值均一，见下图）
但工作中有时会发现同一排或同一行中内标比较离散，甚至有多个内标不起（如F行的F7、F9、F10、F11孔均无内标曲线，无CT值，其余各孔CT值比较离散，见下图）
2.6.2常见原因：①排枪与枪头不匹配，结合不严密，导致加样量不足/不均一；②使用排枪吸取内标混合液时，液体堵住了部分枪头滤芯，导致向裂解板加样时加样量不均一，甚至部分孔没有液体加入。
2.6.3解决方案：建议使用配套量程的枪头，移液器要慢放慢吸；分装试剂和加样时仔细观察液体是否打出。
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珠海宝锐生物科技有限公司成立于2012年，专注于核酸断试诊剂核心原料领域，是珠海市独角兽种子企业、广东省专精特新企业、国家高新技术企业。成功研制了多个系列的高品质分子诊断用酶和配套试剂，已得到众多国内知名企业和研究机构的认可，并广泛应用在诊断试剂的研发和生产中。同时，宝锐大力投入mRNA疫苗原料、NGS建库试剂、数字PCR扩增试剂、STR多重检测试剂等多项研究，相关新品陆续上市。
