基础篇：单克隆抗体知识

文章来源：IVD学习笔记

• 抗体简介
  

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抗体 

• 是一种糖蛋白，又称免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)，是体液免疫应答的产物；

• 能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白；
• 抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原
  抗体一定是蛋白质；
• 机体免疫应答的效应分子，能够识别、中和或清除诱发疾病的抗原；
  
• 由浆细胞（效应B细胞）产生，存在于血液和体液中。

• 由单一B细胞克隆产生的抗单一表位的抗体，具有高度的特异性；
• 单克隆抗体的分子量约为150kD。

• 抗体的结构

• 每条链都有110个氨基酸组成的结构域(domain)；

• 每个结构域内每隔60个氨基酸有两个链内的二硫键连接，二硫键对稳定抗体蛋白结构具有重要作用；

• 可变区(variable,V) ：N端一半的100～110个氨基酸差别较大；

• 恒定区(Constant,C)：C端的一半氨基酸相当保守。

• 抗体的分类

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• IgM：由成熟浆细胞分泌的IgM为五聚体，单体之间的重链由两个二硫键分别将CH4／CH4和CH3／CH3两个结构域连接起来。占人总血清免疫球蛋白的5％～10％；

• IgA：在血清中只占免疫球蛋白的10％～15％，是广泛存在于乳汁、唾液、泪液、支气管粘液、泌尿生殖道及消化道分泌液中的外分泌型抗体，半衰期为6天；

• IgE：只占血清中总免疫球蛋白的十万分之二，可是生物学效应很明显，可以介导速发型超敏反应如哮喘、荨麻症、过敏性休克等；

• IgD占血清总免疫球蛋白的0.2％左右，当IgM和IgD同时存在时，B细胞就很容易被抗原激活。

• IgG：血清中浓度最大，约占免疫球蛋白含量的70～80%，50%分布于血浆。机体受到抗原初次刺激后，迅速产生，速度仅次于lgM。在抗体介导的抗感染免疫中起主要作用。IgG是球蛋白单体，分子量大约为16万～18万。在体内可以有效地抵抗细菌、病毒等微生物侵袭。在体外的血清学反应中，参与沉淀反应、凝集反应、补体结合反应和中和反应。

• IgG结构

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  IgG抗体在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。IgG抗体持续时间长，是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。它们还从乳腺分泌进入初乳，使新生儿第一时间得到抗体保护，其结构如下图：

• 全人源单克隆抗体的发展

• 抗体药物的作用机制

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• 抗体直接作用：抗体作为激动剂或拮抗剂对受体激活或阻断，诱导凋亡或介导药物/毒性试剂；
• 免疫介导细胞杀伤机制：包括补体介导细胞细胞毒性（CDC）、抗体介导细胞毒性（ADCC）和T细胞调控；
• 血管和基质细胞消融：通过破坏或抑制血管生成，阻止肿瘤生长和转移，作用于血管内皮细胞，影响增殖和凋亡；

• 小分子抗体

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• Fab抗体：

  Fab抗体为仅含Fab分子，Fab段由完整的轻链(恒定区CL和可变区VLCL)和重链Fd段(第一恒定区CH1和可变区VH)通过一个二硫键连接形成异二聚体，整个分了大小约占总抗体的三分之一，仅含有一个抗原结合位点。

• Fv抗体：

  Fv抗体仅由轻链和重链的可变区组成通过非共价键连接，是抗体分了保留完整抗原结合部位的最小功能片段。该片段由于是通过非共价键连接的，所以稳定性不好，十分容易解离。
  

• 单链抗体：

  单链抗体的问世解决了Fv抗体的稳定性问题。它由适当的寡核普酸序列将轻链和重链可变区连接而成，形成单一链的分子，故称为单链抗体。
  

• 单域抗体：

  仅含重链可变区，结构比Fv的亚单位还小，它是一个具有抗原结合活性的分子。同完整抗体相比，单域抗体仍然具有与抗体结合的同等能力及稳定性。
  
  

• 单克隆抗体的制备

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制备流程

信息来源：药品研发驿站

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