宝锐LAMP系列｜分子POCT诊断试剂的理想选择——更快速！真高效！

新冠疫情背景下，大规模的基层检测需求，推动了分子POCT进入发展快车道，迅速登上诊断舞台。分子诊断POCT技术集成了分子诊断技术和POCT技术，与传统的qPCR都具有快速、高灵敏度和特异性等优势，同时又突破了现有检测技术对人员/场所的限制，有效缩短检测用时。

面对突发重大疫情，POCT核酸检测可应用于更多场景，实现患者的现场及时检测。 环介导恒温扩增(LAMP)，是2000年由日本荣研化学株式会社开发的一种恒温核酸扩增技术，近十几年来，已成为一种适用于分子POCT平台的理想方法。此技术能在恒温（60-65℃）条件下，一小时内即可完成核酸的扩增，具有特异性强、灵敏度高、反应快速以及不依赖特殊仪器设备等优势。

烧脑的技术原理：环介导恒温扩增技术的核心是同时具备聚合酶活性和链置换活性的DNA聚合酶（Bst DNA聚合酶）。反应过程主要分两个阶段，第一为起始结构产生阶段，利用内引物和外引物特异性识别目标序列的6个不同位点，外引物延伸引发的链置换反应可将内引物延伸产生的单链DNA置换出来，由于内引物的5’端与目标序列的其中一段反向互补，因此被置换出的单链DNA能形成茎环结构，两端茎环构成的哑铃状结构为第二阶段的起始结构。茎环结构的形成是反应能顺利进行的关键，也是环介导恒温扩增技术名字的由来。第二阶段为循环扩增阶段，首先茎环结构的3’末端自身配对延伸，随后内引物与茎环区域结合延伸，并由于另一端茎环结构的自身配对延伸而被置换出来，然后按照这样自身配对延伸和内引物-茎环配对延伸不断循环扩增。LAMP的扩增速度非常快，能在1小时内达到10⁹拷贝，如果在原始的4条引物的基础上，再添加2条环引物，将大大缩短扩增反应时间。

宝锐目前已开发了针对DNA模板的LAMP染料法检测试剂盒和LAMP PH指示剂法检测试剂盒，以及针对RNA模板的一步法RT-LAMP染料法检测试剂盒和RT-LAMP PH指示剂法检测试剂盒。缓冲液体系经过优化，可有效地提高扩增反应速度和产量，且稳定性良好。

宝锐生物LAMP系列之

染料法检测试剂盒

（快速/高效/稳定）

（荧光染料法：常用的荧光染料包括SYBR Green I、Eva Green等。）

/01、LAMP染料法检测试剂盒检测λDNA

实验条件：

注：0.05pg λDNA约为1个拷贝。

实验结果：

注：红色、紫色、蓝色分别代表5pg/T、0.5pg/T、0.05pg/T的λDNA模板加量。

/02、RT-LAMP染料法检测试剂盒检测人总RNA中 β-actin基因

实验条件：

实验结果：

注：红色、黄色、蓝色、绿色、紫色分别代表100ng/T、10ng/T、1ng/T、0.1ng/T、0.01ng/T的人总RNA模板加量。

Ø 冻融稳定性

l 非冻干体系

/01、λDNA测试非冻干体系冻融稳定性

实验条件：

实验结果：

                    冻融5次                             冻融10次                             冻融15次

注：蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为：5pg/T、0.5pg/T 、0.05pg/T。

/02、β-actin基因测试非冻干体系冻融稳定性

实验条件：

实验结果：

                  冻融5次                            冻融10次                            冻融15次

注：蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为：100ng/T、10ng/T、1ng/T。

l 可冻干体系

/01、λDNA测试可冻干体系冻融稳定性

实验条件：

实验结果：

                 冻融5次                              冻融10次                              冻融15次

注：蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为：5pg/T、 0.5pg/T 、 0.05pg/T。

/02、β-actin基因测试可冻干体系冻融稳定性

实验条件：

实验结果：

                  冻融5次                            冻融10次                              冻融15次

注：蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为：100ng/T、10ng/T、1ng/T

Ø 加速稳定性

l 非冻干体系

/01、λDNA测试非冻干体系37℃加速稳定性

实验条件：

实验结果：

                                                      37℃加速6天

注：蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为：5pg/T、0.5pg/T 、0.05pg/T。

/02、β-actin基因测试非冻干体系37℃加速稳定性

实验条件：

实验结果：

                                                            37℃加速6天

注：蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为：100ng/T、10ng/T、1ng/T。

l 可冻干体系

/01、λDNA测试可冻干体系37℃加速稳定性

实验条件：

                                                                 37℃加速7天

注：蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为：5pg/T、 0.5pg/T 、 0.05pg/T。

/02、β-actin基因测试可冻干体系37℃加速稳定性

实验条件：

 实验结果：

                                                                          37℃加速7天

注：蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为：100ng/T、10ng/T、1ng/T。

l 冻干粉

/01、λDNA检测DNA-LAMP冻干粉55℃加速稳定性

实验条件：

实验结果：

                                                                        55℃加速30天

注：蓝色为同批次液体试剂、红色为55℃加速30天的冻干粉。模板加量从左到右为：5pg/T、0.5pg/T、0.05pg/T。

加速前后试剂冻干形态对比

冻干后                            55℃加速30天

/02、β-actin基因检测RT-LAMP冻干粉55℃加速稳定性

实验条件：

 实验结果： 

                                                                  55℃加速30天

注：蓝色为同批次液体试剂、红色为55℃加速30天的冻干粉。模板加量从左到右为：100ng/T、10ng/T、1ng/T。

加速前后试剂冻干形态对比

冻干后                       55℃加速30天

恒温扩增Premix产品

* M01表示红黄变色；*M02表示黄绿变色。